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          技術文章
          酵母雙雜交載體在篩選藥物作用位點及藥物對蛋白相互作用影響
            今天讓我們一起來了解一下酵母雙雜交載體的篩選藥物作用位點及藥物對蛋白相互作用影響
           
            酵母雙雜交的報告基因能否表達在于誘餌蛋白與靶蛋白之間的相互作用。對于能夠引發疾病反應的蛋白互作可以采取藥物干擾的方法,阻止它們的相互作用以達到治療疾病的目的。
           
            例如:Dengue病毒能引起黃熱病、肝炎等疾病,研究發現它的病毒RNA復制與依賴于RNA的RNA聚合酶(NS5)與拓撲異構酶NS3,以及細胞核轉運受體BETA-importin的相互作用有關。
           
            研究人員通過酵母雙雜交技術找到了這些蛋白之間相互作用的氨基酸序列。如果能找到相應的基因藥物阻斷這些蛋白之間的相互作用,就可以阻止RNA病毒的復制,從而達到治療這種疾病的目的。
           
            酵母雙雜交系統的最主要的應用是快速、直接分析已知蛋白之間的相互作用及分離新的與已知蛋白作用的配體及其編碼基因。
           
            酵母雙雜交系統檢測蛋白之間的相互作用具有以下優點:
           
           ?、?作用信號是在融合基因表達后, 在細胞內重建轉錄因子的作用而給出的, 省去了純化蛋白質的繁瑣步驟。
           
           ?、?檢測在活細胞內進行, 可以在一定程度上代表細胞內的真實情況。
           
           ?、?檢測的結果可以是基因表達產物的積累效應, 因而可檢測存在于蛋白質之間的微弱的或暫時的相互作用。
           
           ?、冉湍鸽p雜交系統可采用不同組織、器官、細胞類型和分化時期材料構建cDNA文庫, 能分析細胞漿、細胞核及膜結合蛋白等多種不同亞細胞部位及功能的蛋白。例如已報道成功分析了RAP1與RIF1ii、P21cip1與CDK2iii、p16與CDK4iv等之間的相互作用。
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